IMViC 試驗
<實驗目的>
腸道桿菌科中主要組別之鑑定,
可依其對特異受質之生化性質與酵素反應而定。
可用 IMViC 之系列試驗,
包括吲哚 (indole)試驗、甲基紅 (methyl red)試驗、
伏普 (Voges Proskauer)試驗及檸檬酸鹽利用 (citrate utilization)試驗。
<原理>
IMViC 試驗是數個試驗的集合。
在微生物實驗室中,時常用來鑑定大腸菌群 (Coliform bacteria)。
大腸菌群是革蘭氏陰性菌,是好氧或兼性厭氧桿菌,
會發酵乳糖並在48小時內產生氣體。
食物中若存在一些大腸菌群表示該食物受到糞便污染。
除了小寫字母 "i" 為了發音方便外,
"IMViC" 中每一個英文字母各代表了一種試驗。
「I」代表吲哚試驗 (Indole production test)
在吲哚試驗中測試細菌能否將色氨酸 (tryptophan)分解為吲哚
色氨酸 (tryptophan)為主要氨基酸的一種,
可藉由某些微生物之酵素作用進行氧化,
即以色氨酸酵素 (tryptophanase)
將其轉變為代謝產物 (indole, pyruvic acid, ammonia),
並非所有微生物皆有水解色氨酸之能力,
故可作為生化反應指標。
「M」代表甲基紅試驗 (Methyl red test)
在甲基紅試驗中測試細菌能否將葡萄糖分解產生酸
當細菌利用葡萄糖醱酵的過程中,
可能產生不同的終產物,
有些菌利用葡萄糖時會產生大量的酸,
有些菌則會將酸性物質轉換為偏中性物質。
當細菌利用葡萄糖產生高濃度酸性產物時,
若加入甲基紅指示劑，則有紅色生成。
「V」代表伏普試驗 (Voges Proskauer test)
在伏普試驗中測試
細菌能否將葡萄糖分解為乙醯甲基甲醇 (acetyl methyl carbinol)
用以測定微生物代謝葡萄糖所產生之有機酸
轉變為非酸性或中性產物如乙醯甲基甲醇之能力,
培養基於加入試劑後 15分鐘內,呈深玫瑰色者,
表示乙醯甲基甲醇存在,即陽性反應,如無變化,為陰性結果。
「C」代表檸檬酸鹽利用試驗 (Citrate utilization test)
在檸檬鹽試驗中測試細菌能否利用檸檬酸鹽生長
以大腸菌(E. Coli)為例，其IMViC試驗結果為 (＋＋－－)。
有些細菌於缺乏葡萄糖或乳糖可利用的情況下,
可利用檸檬酸鹽為其生長之唯一碳源,供其能量。
其利用能力係因檸檬酸鹽滲透酵素 (citrate permease)
可促使檸檬酸鹽進入細胞內,
而檸檬酸鹽為克氏循環中主要中間產物,
當檸檬酸鹽酵素 (citrase)作用於檸檬酸鹽時
產生草醋酸 (oxalacetic acid)與醋酸鹽 (acetic acid),
此產物再經酵素作用轉變為焦葡萄酸 (pyruvic acid)與二氧化碳,
所產生之二氧化碳與水結合成碳酸鈉,
而成鹼性產物,使培養基中 pH值升高,
此時培養基中之溴瑞香草藍由綠色變為藍色。
培養之後若斜面有生長情形,且培養基變藍色,表陽性反應。
小寫字母 "i" 只是代表 in：
檸檬酸鹽利用試驗中我們會把大腸菌群放到檸檬酸鹽中 (place "in Citrate")。
<材料>
菌種：大腸桿菌 /葡萄球菌 /乳酪菌
培養基：Tryptose broth、MR-VP broth、Citrate B
試劑：柯瓦克試劑、甲基紅指示劑、檸檬酸鹽試劑
<步驟>
吲哚試驗
將三組試管 (每組四支)之每管各別加入培養基
(I：Tryptose Broth)
→每組各別加入20μl的大腸桿菌 /表皮葡萄球菌 /優酪乳 (乳酸菌)
→於培養箱進行培養 (1天)
→將三組試管(每組四支)之每管各別加入試劑
(I：0.5毫升乙醚→0.5毫升柯瓦克試劑)
→使用振盪器將樣品與試劑混合均勻→觀察其變化並記錄
甲基紅試驗
將三組試管 (每組四支)之每管各別加入培養基
(M：MR-VP Broth)
→每組各別加入20μl的大腸桿菌 /表皮葡萄球菌 /優酪乳 (乳酸菌)
→於培養箱進行培養 (1天)
→將三組試管(每組四支)之每管各別加入試劑
(M：0.6毫升甲基紅指示劑)
→使用振盪器將樣品與試劑混合均勻→觀察其變化並記錄
伏普試驗
將三組試管 (每組四支)之每管各別加入培養基
(V：MR-VP Broth)
→每組各別加入20μl的大腸桿菌 /表皮葡萄球菌 /優酪乳 (乳酸菌)
→於培養箱進行培養 (1天)
→將三組試管(每組四支)之每管各別加入試劑
(V：0.8毫升歐普氏試劑)
→使用振盪器將樣品與試劑混合均勻→觀察其變化並記錄
(其中VP試驗需等待20分鐘再觀察)
檸檬酸鹽利用試驗
將三組試管 (每組四支)之每管各別加入培養基
(C：Citrate Broth)
→每組各別加入20μl的大腸桿菌 /表皮葡萄球菌 /優酪乳 (乳酸菌)
→於培養箱進行培養 (1天)
→C：不用添加觀察其濁度即可
這個實驗對我來說有點複雜,還沒進入狀況就結束了,
只好先記錄一下,再慢慢研究 ~
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